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Mar 18, 2023

Análogos 25OHD e tubos de coleta de sangue a vácuo afetam drasticamente a precisão de imunoensaios automatizados

Relatórios Científicos volume 5,

Scientific Reports volume 5, Número do artigo: 14636 (2015) Citar este artigo

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As variações nos métodos de quantificação da vitamina D são grandes e as influências dos análogos da vitamina D e dos métodos de coleta de sangue não foram sistematicamente examinadas. Avaliamos os efeitos dos análogos da vitamina D 25OHD2 e 3-epi 25OHD3 e métodos de coleta de sangue na dosagem de vitamina D, usando cinco sistemas de imunoensaio e cromatografia líquida-espectrometria de massa tandem (LC-MS/MS). As amostras de soro (332) foram selecionadas a partir de solicitações de ensaios de vitamina D de rotina, incluindo amostras com ou sem 25OHD2 ou 3-epi 25OHD3 e analisadas usando vários sistemas de imunoensaio. Em amostras sem 25OHD2 ou 3-epi 25OHD3, todos os imunoensaios se correlacionaram bem com LC-MS/MS. No entanto, o sistema Siemens produziu um grande viés médio positivo de 12,5 ng/mL e um valor Kappa ruim ao usar tubos com ativador de coágulo e separador de gel. Quando 25OHD2 ou 3-epi 25OHD3 estava presente, as correlações e a concordância clínica diminuíram para todos os imunoensaios. O soro 25OHD em tubos VACUETTE com gel e ativador de coágulo, medido pelo sistema Siemens, produziu valores significativamente maiores do que amostras coletadas em tubos VACUETTE sem aditivos. O viés diminuiu e a concordância clínica melhorou significativamente ao usar tubos sem aditivos. Em conclusão, a maioria dos imunoensaios automatizados mostrou correlação aceitável e concordância com LC-MS/MS; no entanto, análogos de 25OHD e tubos de coleta de sangue afetaram dramaticamente a precisão.

Evidências recentes da associação entre vitamina D e doenças ósseas1, diabetes2, doenças autoimunes3, doenças cardiovasculares4 e câncer5, juntamente com o reconhecimento de que a deficiência de vitamina D é comum, levaram a um aumento maciço nos testes de vitamina D em todo o mundo1,6,7. Por exemplo, na clínica Mayo, os testes para deficiência de vitamina D aumentaram de 80% a 90% ao ano6 e em nosso laboratório, o número de testes aplicados dobrou nos últimos dois anos. Devido a essa carga de trabalho aumentada, imunoensaios automatizados foram desenvolvidos recentemente. No entanto, há grande variação entre os métodos usados ​​para testar os níveis de vitamina D6,8,9.

A 25 hidroxivitamina D circulante (25OHD) é a forma predominante de vitamina D e é geralmente considerada o biomarcador mais confiável da concentração sérica de vitamina D10. 25OHD3 e 25OHD2 são os dois principais tipos de 25OHD: 25OHD3 é produzido endogenamente na pele de animais em resposta à exposição solar e pode ser obtido na dieta por meio de suplementos contendo 25OHD3. 25OHD2 é encontrado em fungos. O 25OHD2 ou o D3 podem ser usados ​​em suplementos ou como aditivos em alimentos como laticínios1. No entanto, 3-epi 25OHD3, um epímero de 25OHD3, foi recentemente identificado. Embora a bioatividade desse análogo ainda não esteja clara11,12, foi demonstrado que 3-epi 25OHD3 causa reatividade cruzada com 25OHD3 em imunoensaios, levando à superestimação dos níveis de 25OHD.

Vários imunoensaios automatizados foram desenvolvidos para detecção de 25OHD. No entanto, a variação entre laboratórios foi relatada em até 38%6,8,13. Além disso, a definição de deficiência de vitamina D ainda é controversa, com grandes variações entre os métodos que contribuem para a controvérsia. Espera-se que essas grandes variações sejam problemáticas para aplicações de diagnóstico clínico usando o mesmo limite para deficiência de vitamina D para diferentes métodos. Portanto, a uniformidade clínica dos diferentes métodos deve ser avaliada.

Cromatografia líquida de diluição de isótopos-espectrometria de massa em tandem (LC-MS/MS) é considerada o padrão-ouro e método de referência para testes de 25OHD14. No entanto, as abordagens LC-MS/MS mais usadas rotineiramente e aquelas que formaram a base para comparar métodos não incluíram a separação de 3-epi 25OHD3 de 25OHD3 porque exigiria análise demorada por cromatografia, o que diminuiria a eficiência da detecção; apenas em estudos isolados o 3-epi 25OHD3 foi medido usando LC-MS/MS14,15.